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Sistema di coltura in vitro stabile di precursori di cellule granulari cerebellari

CervellettoCultura neuronale 3DCultura stabileNeurosferePrecursori dei granuli

Introduzione

Sistema di coltura in vitro di cellule precursori dei granuli cerebellari (granule cell progenitors, GCP) semplice, affidabile, facilmente riproducibile e stabile sia tempo che rispetto al profilo di espressione genica/biochimica delle colture di cellule GCP ottenute, simile a quello di colture di cellule di GCPs fresche e pure rispetto alla possibilità di congelamento e scongelamento delle stesse.

Caratteristiche Tecniche

Valido modello in vitro per lo studio della fisiopatologia dei granuli cerebellari, per lo studio delle malattie cerebellari derivanti da danno o neurodegenerazione, e potenzialmente per il loro trattamento mediante approcci di terapia genica. Dopo la resezione chirurgica da topi nel settimo giorno di vita postnatale, il cervelletto viene triturato meccanicamente in un tampone contenente HBSS, glucosio e antibiotici e le singole cellule così ottenute placcate in un terreno composto da DMEM-F12, glucosio, B27 W / O VitA, insulina, NALC, eparina, antibiotici e fattori di crescita. In questo terreno, le cellule possono essere espanse e mantenute per un tempo illimitato, dopo periodica dissociazione delle sfere e propagazione per diluizione (per prevenire una crescita eccessiva e conseguente morte per mancanza di nutrienti e ipossia). Secondo i modelli di coltura noti, i GCP coltivati ​​smettono di proliferare rapidamente, esponendo ogni volta la necessità di generare nuove colture, oppure sono di origine tumorale e quindi non possono rappresentare correttamente la fisiologia dei GCP.

Possibili Applicazioni

  • Generazione di modelli in vitro per lo studio della fisiopatologia dei granuli cerebellari;
  • Valutazione degli effetti tossici di nuovi farmaci sui GCP “normali” rispetto al cancro in vitro prima di iniziare gli studi in vivo;
  • Trattamento delle malattie cerebellari dovute a danno o neurodegenerazione, utilizzando approcci di terapia genica.

Vantaggi

  • Colture GCP in uno stato di proliferazione illimitata e con un profilo di espressione genica / biochimica paragonabile a quello delle colture GCP fresche, anche dopo lo scongelamento;
  • Preservazione delle caratteristiche fisiologiche dei GCP;
  • Stabilità nel tempo;
  • Affidabilità;
  • Riproducibilità.