Introduzione

La tecnologia in oggetto consiste in un saggio che consente l’analisi quantitativa dell’enzima umano acido nicotinico fosforibosiltransferasi (NAPRT) in fluidi biologici (siero o plasma e supernatanti di coltura cellulare). NAPRT è strutturalmente e funzionalmente correlato ad un altro enzima (NAMPT), noto per essere rilasciato nello spazio extracellulare in condizioni infiammatorie/metaboliche, incluso il cancro. Si ipotizza quindi che anche NAPRT possa essere rilasciato in tali condizioni e pertanto la sua rilevazione nei fluidi biologici potrebbe essere un buon indicatore di una condizione patologica in atto.

Caratteristiche Tecniche

Il saggio oggetto dell’invenzione si basa sulla tecnologia Bio-plex®/Luminex®, che sfrutta la formazione di un legame covalente tra biglie magnetiche e anticorpi monoclonali specifici per l’analita di interesse NAPRT. La rilevazione del complesso biglia-anticorpo-NAPRT avviene mediante l’utilizzo di un secondo anticorpo policlonale diretto contro NAPRT (anticorpo di detection); infine, per la rilevazione finale si utilizza un terzo anticorpo, coniugato con un fluorocromo, diretto contro la specie in cui è stato prodotto l’anticorpo policlonale di detection. I dati di fluorescenza, rilevati mediante un apposito lettore, vengono poi convertiti in concentrazione dell’analita (pg/ml). Ad oggi non esistono in commercio saggi validati che consentano il dosaggio di NAPRT. Grazie al saggio proposto dagli inventori, si ha un’elevata sensibilità (superiore a quella di un saggio ELISA) nella quantificazione di NAPRT nei fluidi biologici. Inoltre, con questo saggio sono sufficiente pochi microlitri di campione.

Possibili Applicazioni

• Monitoraggio in vitro del rilascio di NAPRT nel surnatante di colture cellulari;
• Studi funzionali in vitro/in vivo;
• Determinazione dei livelli di NAPRT nel plasma/siero di pazienti con malattia infiammatoria/metabolica;
• Determinazione dei livelli di NAPRT nel plasma/siero di pazienti oncologici.

Vantaggi

• Determinazione quantitativa di NAPRT in tutti i fluidi biologici;
• Alta specificità e sensibilità;
• Richiede un volume ridotto di campione;
• Riproducibilità dei risultati;
• No cross-reattività con NAMPT.