Introduzione

La microscopia a fluorescenza a super risoluzione (SR), è il metodo preferito per l’analisi di campioni biologici viventi; tuttavia, è limitato a profondità tra le 22:00 e le 15:00. La necessità di visualizzare le attività biologiche in campioni più densi (sopra le 15:00), non trasparenti e non omogenei (ad es. cervelli di topi, tumori, ecc.) ha richiesto lo sviluppo di nuovi metodi. Maggiore è la profondità alla quale viene eseguita l’analisi, più complessa diventa la ricostruzione dell’immagine corrispondente. La microscopia di deplezione mediante emissione stimolata (STED) è stata la prima tecnica SR che ha mostrato sperimentalmente l’uso del concetto di transizioni di fluorescenza ottica lineare saturabile reversibile (RESOLFT) per l’acquisizione rapida di immagini, consentendo la visualizzazione della dinamica biologica a 60-80 nm di profondità.

Caratteristiche Tecniche

La microscopia STED ha successo, presenta dei limiti se utilizzata ad alte profondità in campioni biologici. Questo perché richiede che uno specchio sia posizionato sopra il campione (rendendolo inadatto per campioni spessi) e richiede un minimo di due immagini da acquisire in sequenza da diverse angolazioni, rendendolo così inadatto per applicazioni di imaging veloce. La presente invenzione affronta queste sfide fornendo un metodo di alleggerimento che utilizza un raggio di eccitazione seguito da un raggio di svuotamento per acquisire un segnale di fluorescenza, per analizzare un campione biologico in un sistema di microscopia di svuotamento. Un metodo con risoluzione ottica aumentata, che acquisisce immagini in tutte e tre le dimensioni spaziali, adatto per l’immaginazione di campioni spessi e non omogenei, il tutto in modo semplice ed economico.

Possibili Applicazioni

• Microscopia a deplezione mediante emissione stimolata (STED);
• Analisi di campioni biologici e in vivo.

Vantaggi

• Aumento della risoluzione ottica dei campioni biologici;
• Consente una rapida immaginazione;
• Adatto per campioni densi, non trasparenti e non omogenei;
• Immagini acquisite in tutte e tre le dimensioni spaziali;
• Semplice ed economico da usare.